Nýtt kórónavírus (SARS-Cov-2) kjarnsýrugreiningarsett
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flumálmgrýtiscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Nýtt kórónavírus (SARS-Cov-2) kjarnsýrugreiningarsett (flúrljómandi RT-PCR rannsakaaðferð)
【Packaging specifications 】25 próf/sett
【Intended usaldur】
Þetta sett er notað til eigindlegrar greiningar á kjarnsýru úr nýrri kransæðaveiru í strokum frá nefkoki, munnkoki (hálsþurrku), fremri nefþurrku, miðþurrkara, nefþvotti og nefsog frá einstaklingum sem eru grunaðir um COVID19 af heilbrigðisstarfsmanni sínum. Uppgötvun ORF1ab og N gena af nýju kransæðavírnum er hægt að nota til aðstoðargreiningar og faraldsfræðilegs eftirlits með nýrri kransæðaveirusýkingu.
【Principles of the prósdure 】
Þetta sett er hannað fyrir sérstakar TaqMan rannsaka og sérstaka primera hannað fyrir nýja kórónavírus (SARS-Cov-2) ORF1ab og N gena röð. PCR hvarflausnin inniheldur 3 sett af sértækum primerum og flúrlýsandi mælum fyrir sértæka greiningu á skotmörkum, og viðbótarsett af sértækum primers og flúrlýsandi mælum er notað sem innri staðalstýring á settinu til að greina innræna stofugena.
Prófunarreglan er sú að sérstakur flúrljómandi rannsakann er meltur og niðurbrotinn af exonuclease virkni Taq ensímsins í PCR hvarfinu, þannig að skýrsluflúrljómandi hópurinn og slökkti flúrljómandi hópurinn eru aðskilin, þannig að flúrljómunarvöktunarkerfið geti tekið á móti flúrljómun merki, og síðan Með auðgunaráhrifum PCR mögnunar nær flúrljómunarmerki rannsakandans settu þröskuldsgildi-Ct gildi (Cycle threshold). Ef ekki er um að ræða markamplicon, er fréttahópur rannsakandans nálægt slökkvihópnum. Á þessum tíma á sér stað orkuflutningur flúrljómunarómunar og flúrljómun skýrslugjafahópsins er slökkt af slökkvihópnum, þannig að ekki er hægt að greina flúrljómandi merki með flúrljómandi PCR tækinu.
Til að fylgjast með notkun hvarfefna meðan á prófun stendur er settið búið jákvæðu og neikvæðu viðmiði: jákvæði samanburðurinn inniheldur raðbrigða plasmíð á marksvæðinu og neikvæða viðmiðið er eimað vatn, sem er notað til að fylgjast með umhverfismengun. Mælt er með því að stilla jákvæða og neikvæða samanburðinn samtímis við prófun.
【Main components 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Components | |
Name | Specuppbygging | Magnity | Magnity | |
Jákvæð stjórn | 180 μL/hettuglas | 1 | 1 | Gervi smíðuð plasmíð, eimað vatn |
Neikvæð stjórn | 180 μL/hettuglas | 1 | 1 | Eimað vatn |
SARS-Cov-2 blanda | 358,5 μL/hettuglas | 1 | / | Sértæk grunnpör, sértækar greiningarflúrljómunarnemar, dNTP, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, eimað vatn o.s.frv. |
Ensímblöndu | 16,5 μL/hettuglas | 1 | / | Taq ensím, bakrita, UNG ensím osfrv. |
SARS-Cov-2 blanda (frystþurrkað) | 25 próf/hettuglas | / | 1 | Sérstök grunnpör, sértækar greiningarflúrljómunarnemar, dNTP, Taq ensím, bakrit, eimað vatn osfrv. |
2x Buffer | 375 μL/hettuglas | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Eimað vatn osfrv. |
Athugið:(1) Ekki er hægt að blanda saman eða skipta um íhluti í mismunandi lotusettum.
(2) Búðu til þitt eigið hvarfefni: Kjarnsýruútdráttarsett.
【Storage condþaðons og expiration date 】
For BST-SARS-25:Flytja og geyma við -20±5 ℃ í langan tíma.
For BST-SARS-DR-25:Flutningur við stofuhita. Geymið við -20±5 ℃ í langan tíma.
Forðist endurteknar frystingar-þíðingarlotur. Gildistími er með semingi ákveðinn í 12 mánuði.
Sjá merkimiðann fyrir dagsetningu framleiðslu og notkunar.
Eftir fyrstu opnun er hægt að geyma hvarfefnið við -20±5 °C í ekki meira en 1 mánuð eða til loka hvarfefnistímabilsins, hvort sem dagsetningin kemur fyrst, til að forðast endurteknar frystingar-þíðingarlotur og fjölda frystingar hvarfefna. -Þíðingarlotur ættu ekki að fara yfir 6 sinnum.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. Viðeigandi sýnistegund: Útdregin kjarnsýrulausn.
2. Geymsla og flutningur sýnis: Geymið við -20±5 ℃ í 6 mánuði. Frystið og þiðið sýnin ekki oftar en 6 sinnum.
【Táætlaðing method】
1.Nucleic acid extraction
Veldu viðeigandi kjarnsýruútdráttarsett til að draga út veirukjarnsýru og fylgdu samsvarandi leiðbeiningum settsins. Mælt er með því að nota kjarnsýruútdráttar- og hreinsunarsett framleitt af Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. eða sambærilegt kjarnsýruhreinsunarsett.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Fjarlægðu SARS-Cov-2 blönduna og ensímblönduna, bræddu alveg við stofuhita og blandaðu vandlega með Vortex tækinu og skildu síðan í stutta skilvindu.
(2) 16,5 uL ensímblöndu var bætt við 358,5 uL SARS-Cov-2 blöndu og blandað vandlega til að fá blönduðu hvarflausnina.
(3) Undirbúðu hreint 0,2 ml PCR oktal rör og merktu það með 15uL af ofangreindri blönduðu hvarflausn í hverri brunn.
(4) Bætið við 15 μL af hreinsinni kjarnsýrulausn, jákvæðu samanburðinum og neikvæða samanburðinum og hyljið varlega yfir áttundarslönguna.
(5) Blandið vel saman með því að snúa á hvolf og skilið fljótt til að safna vökvanum neðst í rörinu.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
( 1) Bætið 375 ul 2x buffer við SARS-Cov-2 blönduna ((frystþurrkað) til að útbúa hvarfblönduna. Blandið vandlega með pípettingu og skilið síðan í stutta skilvindu. (Þegar hvarfblanda er útbúin er mælt með því að geyma við -20 ℃ við langtíma geymsla.)
(2) Undirbúðu hreint 0,2 ml PCR oktal rör og merktu það með 15μL af hvarfblöndu í hverri brunn.
(3) Bætið við 15μL af hreinsinni kjarnsýrulausn, jákvæðu viðmiðinu og neikvæða viðmiðinu og hyljið varlega yfir áttundarslönguna.
(4) Blandið vel saman með því að snúa á hvolf og skilið fljótt til að safna vökvanum neðst í rörinu.
3. PCR amplification (Vinsamlegast skoðaðu handbók tækisins fyrir notkunarstillingar.)
3. 1 Settu PCR 8-glasið í sýnishólfið á flúrljómandi PCR tækinu og stilltu sýnið sem á að prófa, jákvæða samanburðinn og neikvæða samanburðinn í samræmi við röð hleðslu.
3.2 Flúrljómunargreiningarrás:
(1) ORF1ab gen velur greiningarrás FAM (Fréttamaður: FAM, Quencher: Enginn).
(2) N gen velur greiningarrás VIC (Fréttamaður: VIC, Quencher: Enginn).
(3) Innra staðalgen velur greiningarrás CY5 (Fréttamaður: CY5, Quencher: Enginn).
(4) Passive Reference er stillt á ROX.
3.3 Stilling PCR forrits færibreytu:
Skref | Hitastig (℃) | Tími | Fjöldi lota | |
1 | Öfug umritunarviðbrögð | 50 | 15 mín | 1 |
2 | Taq ensímvirkjun | 95 | 2,5 mín | 1 |
3 | Taq ensímvirkjun | 93 | 10 sek | 43 |
Glæðingarlenging og flúrljómunaröflun | 55 | 30 sek |
Eftir stillingu skaltu vista skrána og keyra viðbragðsforritið.
4.Results analysis
Eftir að forritinu lýkur eru niðurstöðurnar sjálfkrafa vistaðar og mögnunarferillinn greind. Mögnunarferillinn er stilltur á sjálfgefna þröskuld tækisins.
【Explanation of test resuSíst 】
1. Ákvarða réttmæti tilraunarinnar: FAM, VIC rásin með jákvæðri samanburði ætti að hafa dæmigerða mögnunarferil og Ct gildið er almennt minna en 34, en getur sveiflast vegna mismunandi þröskuldastillinga mismunandi tækja. Neikvæð stjórn FAM, VIC rásin ætti að vera ómagnað Ct. Samþykkt er að ofangreindar kröfur þurfi að uppfylla samhliða því að annars er þetta próf ógilt.
2. Niðurstaða dómur
FAM/VIC rás | Niðurstaða dóms |
Ct<37 | Sýnispróf er jákvætt |
37≤Ct<40 | Mögnunarferillinn er S-laga og grunsamleg sýni þarf að endurskoða; ef niðurstöður endurskoðunar eru samræmdar er hún metin sem jákvæð, annars er hún neikvæð |
Ct≥40 eða engin mögnun | Sýnispróf er neikvætt (eða undir neðri mörkum fyrir uppgötvun setts) |
Athugið: (1) Ef bæði FAM rásin og VIC rásin eru jákvæð á sama tíma, er SARS-Cov-2 staðráðin í að vera jákvæð.
(2) Ef FAM rásin eða VIC rásin er jákvæð og hin rásin er neikvæð, ætti að endurtaka prófið. Ef það er jákvætt á sama tíma verður það dæmt sem SARS-Cov-2 jákvætt, annars verður það dæmt sem SARS-Cov-2 neikvætt.